这在ImageJ里是比较常用的操作,既然两天了也没有人回答,我就唠叨一下吧。
基本上,没有特别要求,怎么照都行,可以叠加。
广义上,共聚焦图像的叠加,通常有不同两种情况:
1,multichannel,双重或多重荧光标记,不同通道不同颜色荧光,这种叠加可称为merge;
2,stack,多层光切片的叠加,一般是Z轴方向,可以有多种算法,这种叠加可称为project。
当然,这两种情况也可以共同出现(为简单见我这里只说单纯情况),一般这两种情况的处理方法不同。
我感觉你是第一种情况。我就按这个说吧:
可以根据你所使用的共聚焦提供的软件设置每个通道为不同的颜色。其实,本质上来说都是伪彩(pseudocolor),就算你用同一种颜色,之后在ImageJ里也可以随意改变成你期望的两种颜色。
我通常用leica的机器,你可能能用别牌子的机器,这都没有关系。一般机器输出的图片都可以从中分离或者在confocal自带的软件里导出成.tiff格式,这个格式大多软件都认,也包括ImageJ。
现在我默认你已经有了两个来自于同一个样品的不同荧光通道的tiff图片,现在你在imageJ里面依次将它们打开,现在到ImageJ主界面菜单栏——》Image——》color——》mergechannels选中,会跳出colormerge对话框,有几个选项我不多讲了,按着软件的默认OK就行了。试试吧
另外,如果你是Zeiss的confocal输出的文件,ImageJ(V1.45)有现成的plugin,操作会更方便一点。
还有问题的话不妨先看看help。