参考答案：D
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我记得我们实验室做这个检测时最强调的是引物设计和扩增条件的优化，因为细胞粘附因子这类基因表达量通常不高，如果引物特异性不好或者退火温度没摸准，很容易出现非特异条带或假阴性结果，哪怕操作再规范也会前功尽弃，所以我认为最关键的其实是PCR反应体系的建立和验证，这直接决定结果能不能信
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我觉得这个问题其实有点陷阱，表面上看选哪个都合理，但真正做过实验的人都知道，mRNA测定中最容易出问题的是样本处理环节，尤其是细胞裂解后要迅速抑制RNA酶活性，否则刚提出来的RNA立马就降解了，就算后面加样器专用、戴手套做得再好也没用，所以最关键的是从取材开始就要控制好时间与温度，这点在临床标本中尤其明显
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说实话这题我一开始也懵了，但后来查了点资料发现关键其实在操作环境的洁净度上，虽然戴手套是基本要求，但更重要的是防止RNA降解和污染，整个提取过程要快且低温操作，特别是逆转录那一步特别容易出问题，很多实验室都在超净台里做，而且用的试剂都得是无RNA酶的，不然结果根本不可靠，所以我觉得最关键的还是全程防污染